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SYBR Green ISYBR Green ISYBR Green ISYBR Green ISYBR Green I |
相对定量 (mRNA表达量分析):基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和内参基因同时分别进行定量,然后求出对于内参基因的目的基因的相对量。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较,可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析。内参基因通常选用表达量相对恒定的Housekeeping Gene,如:GAPDH、β-actin等。通过同时对内参基因的实时检测,可以对样品之间由于起始细胞数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正,达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目的。
SYBR Green I 是一种与双链DNA小沟结合的荧光染料,SYBR Green I只与双链DNA结合才能发出荧光,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,荧光信号与双链DNA分子数成正比,随着扩增产物增加而增加,荧光信号的强度代表了反应体系中双链DNA分子的数量。
样品要求
客户需提供组织、细胞、血液等样品材料,或纯化好的总RNA或总DNA,反转录好的cDNA样品,具体要求如下:
材料种类 |
样品要求 |
起始量 |
血液 |
新鲜血液及抗凝剂处理的全血 |
1ml |
培养细胞 |
离心收集的细胞 |
1x107 |
动物组织 |
一般材料 |
100mg |
植物 |
一般材料 |
100mg |
RNA |
OD260/OD280在1.9-2.1之间,完整性好 |
>1ug |
DNA |
OD260/OD280在1.7-1.9之间,完整性好 |
>1ug |
cDNA |
内参基因检测成功 |
>20ul |
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