克隆载体相关产品选择指南(www.aidlab.cn资料下载栏目):
总论:截至到2015.3.15,北京艾德莱是国内唯一同时掌握和精通XcmI制作T4快速连接载体技术,新一代TOPO拓扑异构酶载体技术,和自杀基因零背景载体技术的公司。
PCR产物克隆载体根据制作的原理分为两种:
一、拓扑异构酶(TOPO)原理;二、快速T4连接酶原理
每一种制作原理的PCR产物克隆载体又分为两种类型:
1. TA克隆(用于带A头PCR产物的克隆,例如taq,LA taq,taq plus等酶扩增产物);
2. Blunt平末端克隆(用于高保真酶扩增的平末端PCR产物,如pfu,kod,vent,Phusion等酶扩增的平末端产物)
一、拓扑异构酶(TOPO)原理的克隆载体分类:
二、快速T4连接酶原理克隆载体分类:
艾德莱PCR产物克隆载体共性:
1. 所有的载体无论是TOPO原理载体还是快速T4连接酶原理载体均可以5分钟快速连接。
2. 所有的T4连接酶原理载体都不需要蓝白斑筛选,阳性率很高,插入1000bp对照质控的时候,随机挑10个,至少有8个有插入。
3. 所有的TOPO原理载体都是真正零背景,不需要蓝白斑筛选,阳性率几乎100%,插入1000bp对照质控的时候,随机挑10个,至少有9-10个有插入。
所有艾德莱TOPO原理克隆载体优势:
本制品和传统的T4连接酶原理不同,它利用了Topoisomerase可以在瞬间(几秒钟-几分钟)、高效(接近100%)连接DNA片段的原理采用本公司独创的工艺制成。
1. 可以在瞬间(几秒钟-几分钟)完成连接。
2. 无需冰浴和热休克,室温5分钟内完成转化;无需1小时复苏,只需37℃10分钟复苏便可以涂板。从连接到涂板全程仅需15-20分钟。
3. 无自连、零背景,无需繁琐蓝白斑筛选,见到长出的克隆便是有插入的(接近100%)。
4. 可以连接长达10kb片段(即使连接5kb片段,挑10个菌落,至少8个是有插入的),是目前世界上最简单、最快速、零背景免筛选的TOPO TA克隆或者TOPO平末端克隆载体。
载体名称中Simple的含义:
载体名字中写着Simple的意思不是简化版的意思,而是指不含多克隆酶切位点(MCS)的意思,就是在克隆位点两边(载体插入点)两边的载体序列没有多克隆酶切位点的意思。Simple类载体在克隆插入位点两侧不含多克隆酶切位点,如果需要做亚克隆,需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如果使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行DNA酶切时,酶切反应将不会受到载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响,可以大大提高酶切效率,增加亚克隆成功率。
综上所述总结选择指南:
客户实验目的
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PCR产物仅需要测序
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PCR产物测序后需要亚克隆
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产物是A末端(TA克隆):
首选CV14或者CV15均可,次选CV04,效果完全可以替换或者超过宝生物的pMD18-T,全式金的pEASY T1/T3,Promega的pGEM-T,或者任何一家公司的TA克隆产品。
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产物是平末端 (Blunt):
首选CV16或者CV17均可,次选CV08,效果完全可以替换或者超过任何一家公司的Blunt平末端克隆产品。
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产物是A末端(TA克隆):
亚克隆的需求完全是客户才知道的,所有只要是亚克隆的客户,只能发下面4种产品说明书让客户自己根据需要自己选择。不懂的可询问。
可选:CV14,CV15,CV04,CV11。在都可选的情况下,优先推荐CV14,CV15。
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产物是平末端 (Blunt):
亚克隆的需求完全是客户才知道的,所有只要是亚克隆的客户,只能发下面4种产品说明书让客户自己根据需要自己选择。不懂的可询问。
可选:CV16,CV17,CV08,CV13。在都可选的情况下,优先推荐CV16,CV17。
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新产品:CV12 Seamless Assembly and Cloning kit 无缝拼接克隆试剂盒
制品说明:本制品不依赖于T4连接酶,不受载体和目的片段的酶切位点限制,而直接用同源重组的方法,采用特殊的重组酶可以将任意方法线性化后的载体和与其两端具有15-25bp重叠区域的PCR片段定向重组,可以快速实现1-5个片段的高效无缝克隆。
产品特点:
1. 30分钟可以将一个或者多个长、短PCR扩增片段(平端、A端均可)插入载体。
2. 不受载体和插入片段酶切位点的可用性和平端/粘性末端的限制,可以在任意位点进行克隆。
3. 无缝克隆,插入点不会引入不需要的碱基序列。
4. 高效、准确,阳性率>95% 。
点突变试剂盒:CV09-One Tube Mutagenesis Kit 一管式突变试剂盒
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